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系统认识、防治非洲猪瘟

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系统认识、防治非洲猪瘟

周友 成都蓄康生物

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非洲猪瘟 (African Swine Fever ASF) 是由非洲猪瘟病毒 (African Swine Fever Virus ASFV) 引起的一类高热性、斑疹性、高度接触性、猪传染病,ASF是世界动物卫生组织法定报告疾病,我国将其列为一类动物疫病。ASF1921年首次在肯尼亚被报道,201881日,在我国沈阳市沈北区确诊首例ASF ASF在世界范围内蔓延了近100年,但没有有效的疫苗、没有特效的药物进行防控,给世界养猪业造成了巨大损失。怎样防控ASF呢?非洲猪瘟的流行必须有传染源、传播途径、易感猪三个基本条件同时存在,缺一不可,我们以此可以控制非洲猪瘟的发生和流行。

1、传染源

1.1、传染源概念

体内有病原体寄存、生长和增殖,并能将其排出体内的动物(昆虫)或者人。就目前的研究和临床证实,ASF的传染源(宿主)有:猪、节肢动物、软体动物等。

1.2ASF主要的传染源

1.2.1、家猪

发病猪和带毒猪是ASF的主要传染源,ASFV通过感染猪的鼻腔、眼睛、口腔、咽部、肛门、尿道、生殖器等部位排毒;研究显示妊娠母猪感染后,从流产胎儿、胎盘等组织能分离ASFV,但不能胎盘垂直传播。临床观察发现,尽管哺乳母猪发病,但哺乳乳猪不发病,具体原因不确切。

1.2.1.1、有临床症状的猪,即发病猪,这是阳性猪场主要的传染源。根据《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2020年版)》的通知要求,这样的病猪必须坚决、彻底的淘汰。

1.2.1.2、无临床症状的猪,即携带者,这是阳性猪场危险的传染源。

1.2.1.2.1、潜伏期ASFV携带者,比如同栏饲养的肉猪、通槽饲养的母猪,空心栏杆饲养的临近猪栏等,如果有1头发病,则其余的猪都可能是潜伏期ASFV携带者。根据《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2020年版)》的通知要求,这样的病猪必须坚决、彻底的淘汰。

1.2.1.2.2、恢复期ASFV携带者,主要临床症状消失后,耐过恢复健康的猪,比如低毒力毒株引起的温和型ASF,耐过后的猪成为ASFV携带者,不断向环境排毒,如西班牙分离的E75毒株等。目前,从p72 基因片段遗传进化分析显示,我国分离的ASFV毒株属于基因II 型,与目前在俄罗斯和东欧流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)同属于一个进化分支,是强毒株,临床以最急性、急性死亡为主。根据《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2020年版)》的通知要求,这样的病猪必须坚决、彻底的淘汰。

1.2.1.2.3、健康ASFV携带者,特别是早在20世纪60年代,西班牙和葡萄牙就用传代致弱株免疫猪,猪表现出ASFV慢性感染的症状,并引发了严重的后果,使猪成为健康ASFV携带者。ASFV是一种大的包膜病毒,病毒基因组由一个线性的、共价封闭的双链DNA分子组成,不同分离株的基因组长度在170190kbp之间变化,编码151167个开放阅读框,编码170多种蛋白质,这些为研究、生产安全、高效的疫苗带来了不小阻力。

1.2.2、野猪

农业农村部新闻办公室33日发布,湖北省神农架林区发生野猪非洲猪瘟疫情,这件事再次引起了同行们的高度关注,之前已经在全国报道了多起。我国野猪自然分布区主要在大兴安岭、长白山区、松辽平原、黄淮平原、黄土高原以及西南山区和华南丘陵地带,存在1 个种、7 个亚种,即东北亚种、喜马拉雅亚种、华南亚种、新疆亚种、川陕亚、台湾亚种和印支亚种。为了阻断疫情在家猪、野猪间相互传播,农业农村部印发了《关于强化家猪野猪非洲猪瘟联防联控工作的通知》。这个目前来看,不是我国主要的传染源,但必须引起高度重视,我国的许多种猪企业与野猪的分布区域很靠近。

1.2.3、节肢动物类传染源

1.2.3.1、软蜱

ASF由ASFV感染引起的猪传染病,ASFV 属于大型、双链DNA病毒,是非洲猪瘟病毒科的唯一成员,也是迄今所知唯一的虫媒DNA 病毒。迄今为止,国内外研究证实可以感染并传播ASFV的蜱局限于软蜱科钝缘蜱属的软蜱,目前,我国未有这方面的报道,但也必须引起高度重视。刘建等利用软件评估的方法认为我国长江黄河流域属于钝缘蜱的高发区域,然而到目前为止,中国仅发现有3 种钝缘蜱,包括跗突钝蜱、塔氏钝蜱及桦尖钝蜱。形态学对比分析和基于16SrDNA 核酸序列的进化分析均显示桦尖钝蜱与非洲钝蜱复合组具有很近的亲缘关系,提示桦尖钝蜱具有成为ASFV 媒介的潜在可能性。塔氏钝蜱与摩洛钝蜱亲缘关系较近,因此,也不排除成为ASFV 宿主和媒介的可能性。软蜱是ASFV繁殖的自然宿主和天然储存库。

1.2.3.2、牛虻、蚊子

蚊子、牛虻等吸血昆虫可以通过叮咬把ASFV经感染猪向未感染猪传播。已经证实牛虻(厩螫蝇)能携带高滴度ASFV,并持续48小时;苍蝇在吸食感染ASFV病猪血液后,也能在24小时内将ASFV传播给易感猪。严格讲,蚊子应该属于传播媒介,不是宿主。

1.2.3.3、虱子

人工感染条件下,家猪身上所携带的猪血虱、猪虱中也可以检测到ASFV

1.2.4、软体动物

广东省农业科学院动物卫生研究所勾红潮讲,ASFV在水蛭体内存活可达140天,我国大部地区的湖泊、池塘、水田、潮湿山林中均有分布。

1.3、怎么发现ASF传染源

1.3.1、对于病猪,采用临床典型症状+病理解剖

1)、主要临床症状:

无症状突然死亡;发病率低、病死率高;高热,体温升高40.5 -42.5℃(随着药物的使用,体温升高不明显了。有的用药后呈现低温。);耳、四肢、腹背部皮肤发红、发绀、出血点、出血斑、甚至血肿;呕吐,腹泻或便秘,粪便带血;虚弱、步态僵直,运动失调,不愿站立等;精神沉郁;怕冷、蜷缩、扎堆。偶见眼、鼻有黏液脓性分泌物(个别有血泪);皮肤发黄、黄染;(出血严重的皮肤苍白)。

2)、其他临床症状:

食欲下降,表现出精神沉郁者则无食欲、饮欲(胃肠呆钝);呼吸困难,湿咳;关节疼痛、肿胀;妊娠母猪流产、死胎、弱仔。

3)、剖检变化,最明显的剖检病变是:

脾脏显著肿大,一般情况下是正常脾的3-6 倍,颜色变暗,质地变脆;淋巴结( 特别是胃肠和肾) 增大、水肿以及整个淋巴结出血,形态类似于血块;肾脏表面瘀点( 斑点状出血)

4)、剖检变化还可能包括:

皮下出血;心包积液和体腔积水、腹水;心脏表面( 心外膜)、膀胱和肾脏( 皮质和肾盂)的出血点;肺可能出现充血和瘀点,气管和支气管有泡沫,严重肺泡和间质性肺水肿;瘀点、瘀斑( 较大的出血),胃、小肠和大肠中过量的凝血;肝充血和胆囊出血。

1.3.2、对于潜伏期的猪,

1)、神态观察法:从临床反馈来看,处于ASF潜伏期的80斤左右的商品猪有收腹动作、腰腹部肌肉震颤、个别猪在栏内“欢跳”(欢跳属于躁动、腹痛,严重的从一个栏跳到另一个栏。欢跳后神呆,与正常的猪欢蹦不一样,目光无神,听到响声能转头。)、眼睛分泌物多(下眼睑与眼球交界处有血泪)、红眼、食欲不振;随后有的猪离群、猪群松散(没有抢食等现象)、猪沉郁、精神不振、对饲养员反应冷淡等。

哺乳仔猪零星死亡,打针时针孔处流血不止;背部皮肤粗糙、蜕皮,消瘦。

2)、体温确定法:根据猪场健康猪体温为准线,超过平均温度2℃的;(分娩前2小时、产后24小时内体温高的除外)。用红外体温仪检测最好。

3)、食欲判断法:特别适合定点、定时、定量饲喂的猪场,放料后20分钟内不能吃完饲料、饲料剩余超过15-30%的。对于咽喉肿痛的猪,看见饲料后有想吃但又不敢吃的表现。对于母猪,有厌食、瘫痪、无乳、眼角流血、突然吃料很好的,往往3-5天后发病。

临床证明,针对母猪,利用红外体温仪+食欲,能很好的定点淘汰(拔牙式)病原携带者。

4)、试剂检测法:根据我国非洲猪瘟病毒特点,建议预防性检测以唾液为最好,死猪则唾液和血液都可以。自然状态下感染的猪,病毒在唾液中出现要先于血液3-20天,但要注意饲料的污染。但一定要注意,不能因为检测而传播病毒。对于确诊有重要意义。

1.4、怎么处理传染源?

对于传染源,越早发现、早检测、早发现、早处理、早隔离,越有利于ASF的防控。(快准狠)

1.4.1、家猪:

根据《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2020年版)》的通知要求,快准狠坚决、彻底的淘汰传染源。

a、如果猪场各栋猪舍内都有猪发病,建议整个猪场关闭;(商品猪)

b、如果某一栋猪舍内,不同栏内的猪都有发病(或者超过50%的栏发病),建议整栋淘汰;(商品猪)

c、如果某一栋猪舍内,只有一栏内的个别猪发病、同栏中还有健康猪,建议整栏猪淘汰(如果猪栏之间只有几根栏杆的,临近几栏猪都淘汰);(商品猪)

d、商品猪超过160斤,立即卖掉。

e、对于母猪完全可以采取定点淘汰制度(定位栏可以;大栏饲喂的执行商品猪淘汰模式。),通过红外体温仪+食欲变化,发现一头淘汰一头,特别是在体温刚升高时立即淘汰。

1.4.2、野猪:

根据《关于强化家猪野猪非洲猪瘟联防联控工作的通知》做好工作,特别是有野猪分布的区域。

1.4.3、节肢动物

做好软蜱、牛虻、苍蝇、蚊子的消灭工作。

1.4.4、软体动物

做好蚂蟥的消灭工作。

1.5、我们为什么要淘汰传染源-病猪、潜伏感染猪?

a、我国流行的是强毒株(基因II 型,潜伏期4-6天,死亡率100%),没有疫苗;

b、发病的猪大量排毒,是污染饲料和环境的最大传染源;

c、猪一旦表现出临床症状,病理显示猪已经五脏六腑等已严重损伤;

d、猪本身的有限经济价值决定了不能治疗,类似的病势在人也难保性命。

e、病猪本身采食、饮水几乎停止,不方便药物的使用。

f、非瘟是传染病,有传染性、流行性,不是四时感冒。

g、特别是一些注射了疫苗的猪场,尤其是种猪,虽然能生存,却是潜伏者,而且不易检测到病原。

2、传播途径

2.1、传播途径、传播机制概念

传播途径是病原体(ASFV)从传染源排到体外,借助传播媒介(有的可能不需要),经过一定的传播方式,到达与侵入新的易感者(猪)的过程。

病原体在长期演化过程中不但适应在机体的一定部位发育、繁殖,并且也适应在宿主机体外的自然条件下暂时存活,尔后再侵入一个新宿主,循此世代绵延,以维持病原体作为一个生物种的存在。此种更换宿主的过程,在流行病学中称为传播机制。各种传染病的传播机制可概括为三个阶段:①病原体自宿主机体排出;②病原体停留在外界环境中;③病原体侵入新的易感宿主体内。

ASFV能够通过呼吸道(鼻腔)、消化道(扁桃体)、生殖道和肌肉(伤口)等多种途径感染猪只,从口腔感染时首先在扁桃体、下颌淋巴结或其他局部淋巴结中复制(此阶段属于检测空白期,假阴性。国内ASFVⅱ毒株Pig/HLJ/18经肌注后,2-3天检测到病毒血症的存在,4-5天后在口腔试子检测出病毒。自然感染则口腔试子先检测到病毒。),之后病毒随血液或淋巴液扩散,形成病毒血症,并前往其他二级器官复制,如肝脏、肺脏、骨髓、肾脏、肠道等。ASFV 感染初期的主要靶细胞是存在于组织中的单核细胞/ 巨噬细胞,病毒在其中复制并随之扩散到其他组织器官;随后病毒开始大量感染其他类型的细胞,已确定的细胞种类包括:肝细胞、肝肾毛细血管内皮细胞、扁桃体上皮细胞、纤维母细胞、网状细胞、平滑肌细胞、血管外周细胞、肾小球系膜细胞、巨核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞等。自然感染的猪,潜伏期4-19天不等(强毒株4天左右)。之后,ASFV经过唾液、呕吐物、呼出飞沫、粪便、尿液、血液、乳汁(临床发现哺乳母猪发病时哺乳乳猪不发病)、精液、眼泪、羊水、生殖道分泌物等排到体外,进而污染环境和各种媒介,易感猪接触后引起发病。也可能经过猪源制品传播,感染易感猪。

2.2ASFV传播的主要传播方式、传播媒介

2.2.1、关于ASFV的垂直传播问题

a)、ASFV能通过胎盘吗?不能。但能损伤胎盘致流产。

b)、ASFV能进入精液中码?能,所以采精、稀释、存放、配种等环节要注意。

c)、胎儿通过产道时易感染吗?能。

d)、母猪哺乳时,乳猪易感染吗?临床发现,乳猪在哺乳期间不发病。

2.2.2、关于ASFV的直接传播问题

a)、传染源与易感猪直接接触,如自配、哺乳、转栏、合群、同栏饲养猪等,通过直接接触、打架、交配等传播感染。

b)、有野猪出没的地方,野猪与家猪之间可以直接接触传播感染。

c)、软蜱、牛虻、蚊子(生物性传播、机械性传播)、水蛭等与易感猪接触能直接传播感染。

d)、同栏内近距离的ASFV飞沫传播,也存在空心栏杆的挨近猪的传播感染。

2.2.3、关于ASFV的空气传播(气溶胶传播)问题

丹麦Ann Sofie Olesena通过实验证实,ASFV毒株可以通过直接接触和短距离气溶胶有效传播。ASFV空气传播的有效距离在2m以内(WilkinsonP Jet al.,1997)。ASFV主要通过呼吸道(鼻腔)感染传播,由于猪特殊的解剖结构(吻突),更易通过鼻腔感染。阳性猪场中采用空心栏杆饲养、或隧道式通风的猪舍要特别注意空气传播。这涉及到自然通风、封闭通风设备(风机、湿帘)、风速风向(我们在临床发现,处于上风口的病猪很易引起整栋猪舍猪感染)等。

另外,作为环境影响因子,与空气有关的温度(怕高温,环境T=50℃,ASFV存活时间3小时;T=56℃,70分钟;T=60℃,20分钟。)、湿度(喜潮湿,有利于病毒复制。)、浊度(尘埃也可能成为ASFV传播媒介)、风速(飞沫、气溶胶的传播)、阳光(紫外线照射可以杀灭病毒)、有毒有害气体等与ASFV的致病力有很大的关系,中医的五运六气发病病因学说很是推崇。

2.2.4、关于ASFV的饲料传播问题

由污染了ASFV的饲料作为传播媒介而引起的,与消化道(口腔)为主要侵入门户(感染渠道)有关。此处的饲料涉及广义的范围:饲料原料、添加剂、牧草、饲料加工运输储存饲喂设备等、牧草等。ASFV在常规豆粕、胆碱、全价饲料中的半衰期分别是4.65.14.3天(ScottDee2018),因此可以通过额外延长储存时间来避免可能存在的ASFV风险。国外进行模拟田间试验结果表明,饲料中低剂量病毒(104TCID50)即能感染猪只。

2.2.5、关于ASFV的水传播问题

水作为传播媒介较固体的饲料更易感染(需要的感染ASFV数量更少),此处的水涉及广义的范围:饮水(井水、河水、水池、饮水嘴等)、冲洗水、环境的潮湿度(ASFV怕干不怕湿,中医病因学说认为湿邪影响猪的体质,损伤脾胃、阻遏阳气等)。国外进行模拟田间试验结果表明,饮水中低剂量病毒(100TCID50)即能感染猪只。

2.2.6、关于ASFV的活媒介(人、鼠、蝇、蚊、牛虻、水蛭等,虫媒传播)传播问题

2.2.6.1、机械性携带传播

人、鼠、蝇、蚊、牛虻、软蜱、水蛭、鸟、野猪、鸡、狗等等。

根除人对传染病的传播是一项艰巨、甚至是难以实现的任务。我们一定要严格执行猪场卫生防疫制度、消毒程序等。

2.2.6.2、生物性携带传播

主要是牛虻、水蛭、野猪、软蜱等。

2.2.7、关于ASFV的伤口传播问题

注射、咬伤(猪之间打架、蚊子叮伤等)、分娩损伤、配种、体温测量

2.2.8、地面、草地、土壤、粪便(粪尿)

特别是在暴雨季节,往往下雨后、水浸猪场后,ASF就爆发。古人云,大灾之后大疫。特别是平时要做好病死猪的无害化处理。室温下的粪便11天内有传染力,被污染的猪圈30天内有传染力。

2.2.9、社会环境

生猪大跨度运输、病死猪肉流通、人为投毒等。20181123日,中国农村农业部发布的消息称在中国非洲猪瘟的传播途径主要有三种:一是生猪及其产品跨区域调运,占全部疫情约19%;二是餐厨剩余物喂猪,占全部疫情约34%;三是人员与车辆带毒传播,这是当前疫情扩散的最主要方式,占全部疫情约46%。可以预见,随着疫情和防护措施的变化,第一和第三种传播方式将占更大的比例,而且野外动物(野猪、软蜱、鸟、啮齿动物、犬猫等)的重要性将大幅提高。

2.2.10、运输工具

猪场内饲料转运车、猪舍内粪便清理运输车等;猪场外运猪车;员工车辆等。

2.2.11、关于ASFV的猪源产品传播问题

猪肉、脏器、腊肉、血液及其制品、泔水等。

2.3、怎样切断传播途径

2.3.1、早检测、早发现、早淘汰传染源,消灭传染源。

2.3.2、消毒、消毒、再消毒,净化传播媒介,杀灭ASFV

比如空气ClO2、中药熏蒸;饲料的高温制粒、长时间堆积;饮水漂白粉、紫外线消毒;地面的石灰粉覆盖、火焰焚烧等等。更多消毒参考《非洲猪瘟清洁消毒技术要点(第二版)》。

战非洲猪瘟,你的消毒对了吗?现在,许多猪场消毒确实有点过度,而且促进非洲猪瘟爆发!比如:

1)、过氧乙酸等带猪消毒,引起鼻粘膜损伤,有利于非洲猪瘟病毒通过鼻腔感染。(我国非洲猪瘟感染的主要途径鼻腔感染。而且长期高密度消毒,也会引起鼻腔菌群失调。)

2)、夏季高温,加上带猪雾化消毒引起猪舍湿度大,有利于非洲猪瘟病毒繁殖(最近南方高发与高温高湿气候有很大关系)。

表面上是消毒抗非瘟,实际成了非瘟的帮凶。

猪舍内使用石灰粉(南方潮湿使用生石灰,北方干燥使用熟石灰。石灰粉的使用量标准:脚压有脚印,抬脚后不见地面。使用后只要石灰粉出现结块现象立即更换。)消毒(凡是猪不能接触的地面,用石灰粉覆盖,这是截断当前饲养员传播的最有效方式),保持猪舍干燥(这是抑制非洲猪瘟病毒生存的最佳办法,生石灰能吸收猪舍内的水汽,降低湿度。当然北方有的地方干燥,可以换成新鲜的熟石灰。),没有必要采用带体消毒(非洲猪瘟属于高度接触性传染病,不是空气传播,带体消毒时许多消毒剂很易破坏鼻腔粘膜,破坏鼻腔菌群稳定。呼吸道鼻腔感染是当前主要感染途径。另外还增加了猪舍内湿度,有利于病毒繁殖等。);猪舍外专人用高压动力喷雾器2次/天等(特别是沟、草丛等,非雨天路面、广场、出猪台、大门处等也需要石灰粉消毒覆盖。猪场大门和售猪台,是外来人员与猪场人员交流的地方,更要用石灰粉覆盖,建议此时猪场人员使用一次性防护服)。

2.3.3、建立疫点、疫区,隔离、隔离、再隔离易感动物;

比如单栏饲养(定位栏、产床)、降低饲养密度、实心猪栏、一猪一料槽一水嘴等。这就好比新冠肺炎的“放舱”,人民的“口罩”。

2.3.4、封闭式饲养管理。

减少猪场内外人员的交流、猪场内生产和管理人员的交流、生产人员内部交流等。

2.3.5、建立健全、落实猪场卫生防疫制度、消毒程序。

3、易感动物

3.1、易感动物、易感性概念

易感动物(猪)指对某种病原体(ASFV)高度易感(高易感性)暂未发病的健康动物(猪)。动物对某种传染病具有容易感染的特性,称为易感性。动物群中若有一定数量的易感动物,则称为易感动物群。

3.2ASF的易感动物

家猪和欧洲野猪(我国只报道了几例发病)对ASFV高度易感,软蜱是易感动物,非洲野猪(疣猪、薮猪)是ASFV的储存宿主。兔接种ASFV后表现出类似猪感染后的病变。小鼠和仓鼠接种ASFV后不表现出临床症状,但ASFV可以在其体内增殖(至于猪场内老鼠是否有此特性,没有相关报道。)。牛、羊、豚鼠、犬、猫、禽等接种ASFV后临床症状和病理检查均未见异常,血液中未能检测出ASFV。在非洲,家猪-野猪-钝缘蜱形成传染环。

3.3、怎样去保护ASFV的易感动物-

有关涉及传染源、传播途径的内容参考其它两篇文献,本文主要论述疫苗、化药、中药等的研究综述。

3.3.1、ASFV的疫苗问题

随着现代生物学的发展,ASF 疫苗研发取得了较大的研究进展,但针对ASF,仍尚未研制出能提供安全、高效的疫苗。简述一下各类型疫苗的特点。

疫苗

现状

灭活疫苗

无明显保护作用、无高水平细胞免疫;

亚美尼亚ASFV强毒株副作用:高热、食欲不振、轻微神经症状、部分死亡。

自家苗无效;康复猪血清无效。

ASF不产生中和抗体。

临床观察到特异性抗体有促进疾病增强的作用(类似蓝耳病的抗体依赖性增强ADE

减毒疫苗(传代致弱、天然致弱、重组致弱)

ASF天然和体外减毒疫苗仍然有毒力返强、免疫原性差、强度攻击后出现死亡和慢性感染,保护力不足;对异源保护有限甚至无。

西班牙葡萄牙天然致弱:关节炎、肺炎、流产、死亡、带毒(造成世界首次国家级的疫苗毒、低病毒血症);

DNA疫苗(核酸疫苗)

能诱导IFN-γ、体液免疫、细胞免疫(可诱导较强的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应);不能抵抗强毒株;

亚单位疫苗(杆状病毒载体)

产生P72 P54 的抗体可以防止病毒吸附,P30 的抗体可阻止病毒内吞作用;能产生特异性抗体,但不能有效抑制ASFV感染;有的只能延缓临床症状、降低病毒血症,50%左右存活率。

基因缺失疫苗

同源保护好,有的能抵抗异源毒株攻击;挑战1) 需建立区别疫苗免疫与野毒感染的 (DIVA) 诊断方法;2) 需构建病毒稳定表达的细胞系,原代单核-巨噬细胞仅限于实验室对ASFV 生物特性与免疫原性的研究,不适合用于疫苗批量生产,其他易感细胞传代后病毒容易变异;3) 需建设安全的病毒操作平台,ASFV 致病性、攻毒模型、免疫效力评价需在动物生物安全三级 (ABSL3) 以上实验室进行;4) 安全性及免疫原性评价周期较长,基因缺失疫苗专利申请及兽药证书的审批需要严格评估程序,确保毒株在宿主及环境中安全、遗传稳定,且免疫效力不受影响。

猪免疫后出现剂量依赖性发应:精神沉郁、食欲降低、发热、病毒血症、高丙球蛋白血症、肺炎、关节肿胀、跛行、慢性病变、僵猪等。母猪:早产、死胎、弱仔、断奶成活率低、乳猪带毒等。

病毒活载体疫苗(腺病毒、痘病毒、伪狂犬病毒)

诱导细胞免疫和细胞毒性T 淋巴细胞(CTL)反应

3.3.2、抗ASFV的化药(文献略)

3.3.2.1、在细胞水平针对组蛋白脱乙酰酶( HDACs )抑制的实验,TSASAHA VPA NaPB等分别联合ASFV-TopII抑制剂恩诺沙星,通过破坏组蛋白H3K9/K14,抑制ASFV蛋白乙酰化,能不同程度抑制ASFV复制;

3.3.2.2、在细胞水平针对ASFV-TopII的实验,恩诺沙星、香豆素A1、杨梅素等有一定的作用。

实验显示,恩诺沙星抑制ASFV的最低有效剂量是256 mM ( 92.00μg / ml ),那临床是否可行呢?我们查阅了资料,猪通过口服后,最高的血液浓度是2.5μg/ml,所以是无效的。当然,从现有资料来看,恩诺沙星确实有不可逆破坏“拓扑异构酶II”的作用,但就是无法在猪机体内实现这个浓度,即使实现这个浓度,估计猪也因为恩诺沙星中毒了。

3.3.2.3、在细胞水平对ASFV蛋白P30P72影响的实验,白藜芦醇和氧化白藜芦醇对ASFV蛋白的合成都有抑制作用。(中药活性成分。)

3.3.2.3、在Vero细胞和猪巨噬细胞上验证对ASFV-topo IIATP结合位点的四个残基( Asn-144Val-146Gly-147Leu-148 )的实验,类黄酮或多酚类化合物,如芹菜素和染料木素(中药活性成分之一)通过干扰病毒DNA合成抑制非洲猪瘟病毒的体外复制。

3.3.2.4、针对非洲猪瘟病毒DNA聚合酶X(AsfvPoLX)的实验,杨金波利用计算机辅助药物设计技术,筛选了75个有苗头作用的天然产物。

3.3.2.5、针对羟甾醇结合蛋白(OSBP)和OSBP相关蛋白、PI4KACBD3的实验,伊曲康唑(ITZ)和25-羟基胆固醇(25-HC)显著降低了非洲猪瘟病毒的复制。

3.3.2.6、在靶向设计抗ASFV药物方面:中国科学院微生物研究所高福院士团队在非洲猪瘟病毒关键酶(dUT-Pase)结构解析与药物靶点研究中取得突破性进展;清华大学向烨研究团队获取了正确折叠的p72蛋白以及高分辨率结构;复旦大学甘建华团队成功解析了AsfvDNAL与不同DNA底物的高分辨率结构。

3.2.7、也有针对核壳蛋白的pS273R酶(催化pp220pp62多蛋白前体成熟)的结构解析和药物研发。

此外,有资料显示有的核苷类似物抑制了Vero细胞中的ASFV感染;干扰素-α和干扰素-γ的联合治疗,可以治愈Vero细胞,使其免于ASFV的溶解和持续感染;利福霉素衍生物抑制了ASFVDNA依赖型核糖核酸聚合酶;也有采用siRNA来治疗ASF的;多糖如硫酸多糖lambdakappa角叉菜胶、聚硫戊聚糖和岩藻聚糖在Vero细胞中显示出抗ASFV活性,λ卡拉胶最有效,其次是聚硫戊聚糖;用没食子酸月桂酯处理导致ASFVVero细胞中的体外复制受到显著抑制,在病毒吸附之前添加月桂基没食子酸酯完全消除了ASFV感染等等。

3.3.3、中医药

目前,抗击非洲猪瘟,没有公认的有效疫苗、西医特效药,但中医有千年传承的成熟的有效方案。同时,我国地域辽阔、气候环境差异大、动物体质差异大,同为非洲猪瘟病毒(目前还未有关于毒株变异、致病力有强弱之分),临床症候却有地域差异、但可以以地域为区域有针对性进行辨证施治,特别是规模化猪场,以提高防治效益,特别是中药治疗传染性疾病(瘟疫),不能一病一法一方一药走天下。

3.3.3.1、近年,中医参与的主要瘟疫病(传染病)防治

1)、1956年,石家庄市曾流行乙型脑炎,用清热解毒、养阴法治疗(温热疫),治愈率达90%以上。1957年,蒲辅周从临床实践中发现,北京多年阴雨连绵,湿热交蒸,因此属暑湿偏盛,遂用杏仁滑石汤、三仁汤等化裁,通阳利湿,收到了良好效果(湿热疫)。蒲辅周在总结经验时说:“在这一次实践中体会到:由于气候的影响,今年的患者在诱因上多有暑湿并重的现象,个别的还有一些变症,我们在治疗脑炎过程中,随时都要注意到这一些”。从西医角度看,病原都是乙脑病毒,然而中医病因学说却认为病机不同:温热疫、湿热疫;不能一病一法一方一药走天下。

2)、1996年,香港H5N1禽流感。

3)、2003 年严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒,邓铁涛采用中医治疗,实现4个“0”:零死亡、零转院、零感染、零后遗症。

3)、2009 年的H1N1 型禽流感病毒,形成了金花清感颗粒。

4)、2012 年中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒。

5)、2013 H7N9 型禽流感病毒,形成了连花清瘟胶囊。

6)、2019 年新型冠状病毒(2019 novel coronavirus2019-nCoV),形成三方三药(金花清感颗粒、连花清瘟胶囊、血必净注射液和清肺排毒汤、化湿败毒方、宣肺败毒方),惠及世界。充分彰显了中医“辨证论治”的理念,武汉的新冠肺炎“寒湿疫”、广东“湿热疫”等等(中医辨证)。佐证了不能一病一法一方一药走天下。

3.3.3.2ASF的辨证施治?

3.3.3.2.1、ASF症候:总体来说,主要的临床症候是发热、斑疹、嗜卧、扎堆、呕吐、黄疸、结膜炎、食欲呆钝、妊娠母猪流产等。剖检有肝脾肿大、体腔积液、淋巴结肿大出血、肾出血、呼吸道充满粘液、肺出血水肿、胆囊充盈肿大等。微观辨证有细胞因子风暴等。

3.3.3.2.2、ASF病机:疫戾之气怫郁三焦,化火结毒致瘀酿痰,迫血妄行(本文仅就其中一个症候剖析)。

1)、热毒逆传,气血两燔

猪首先表现卫分证(发热、怕冷打堆,是由里证郁结浮越于外所致,假卫分证。),然后病情迅速恶化逆传心包,出现营分证和血分证(高温达40~42℃ 、皮肤发绀、发红、出血点、出血斑,心跳加快,呼吸困难,昏睡,有的便血、鼻血,有的黄染等;解剖见心脏外膜出血、心包积液;肝脾肿大。),死亡率100%。从中医关于瘟疫卫气营血正传和逆传的辩证规律来看,短暂的卫分证,迅速逆传心包,出现气(营)血两燔证型的临床特点,非洲猪瘟表现出明显的发展快、变化速、来势凶、病势重、威胁大等特点。

2)、热毒炽盛,迫血妄行

血得寒则凝、得温则通、得热则妄行。热为阳邪,其性酷烈,蟠灼营血,致使血液沸腾,继而妄行不循血府,溢于脉外,正如柳宝治所说:“血为热所迫,不安其络,因而上溢下来”。临床证见:耳、四肢、腹背部皮肤发红、发绀、出血点、出血斑(血肿)、粪便带血。解剖后见,脏腑、肠系膜淋巴结(临床有的猪肠道大量出血时,肠系膜淋巴结似紫葡萄状就少见了。)等出血;特别是皮肤出血不严重的肠道出血特别严重等。

3)、热毒内炽,伤津耗血

热毒逆传,邪热入营血,迫血外行,消耗营阴,证见出血、胸腔心包腹腔大量积液,病猪便秘与腹泻交替(热结旁流),血便。迫津外泄,消灼阴液,临床表现尿短少黄;哺乳母猪无乳;心神失养而沉郁嗜睡。

4)、热毒熏灼,血络瘀阻

《金匮要略》指出:“热之所过, 血为之凝滞。”《丹溪心法六郁》中也提出“血受温热,久必凝淤。” 《温热经纬》:“热毒壅内,络气阻遇。”气为血帅,气滞则血瘀。叶天士曾谓:“热毒盛而蔽其气,淤其血。”王清任则更进一步指出:“血受热煎熬成块”,说明温热热毒奎滞阻碍气血运行,从而导致脉络淤阻。证见:病猪高热持续,耳朵、皮肤发红、发绀、发紫等,皮肤色泽昏暗(实际是肌肉内出血,所以有的地方反馈病猪皮下出血点、斑少);解剖肝脾肿大。

5)、热毒横逆,扰神动风

《素问•灵兰秘典论》:“心者,君主之官。神明出焉。《素问•五脏生成篇》:“诸血者,皆属于心。”《素问•痿论》:“心主身之血脉。”。心藏神与心主血脉,二者密切相关,血是心的物质基础,心血充足,心神得养,则皮毛光彩精神倍。热毒邪灼液成痰,蒙蔽心包,证见:病猪精神沉郁、嗜睡、对周围环境反应低下,甚至消失(临床反馈,发病前,有的商品猪呈兴奋状态,可见此病传变之快)。《灵枢•本神》提到:“肝藏血,血舍魂。”,《素问•痿论》:“肝主身之筋膜。”《素问•六节脏象论》:“肝者……其充在筋。热毒伤津耗血、血络瘀阻,肝血不足,血不养筋。证见:病猪嗜卧、后肢不能站立、不愿运动或少动、走路摇晃等。

6)、热毒郁滞,水浊内阻

热毒炽盛,不但动血出血留淤、炼伤阴血津液,而且能影响三焦气化功能,使水谷津液不能正常敷布,反而停积成为有害的“痰饮邪毒”,证见心包、胸腹腔积液;以致阴津不足与痰饮蓄积并存,成湿热交织状,交阻肝胆,证见:皮肤泛黄、呕吐;交阻脾胃,证见:腹泻等;交阻肺脏,证见:咳嗽、多痰。

7)、热毒熏灼,侵扰血海

妊娠母猪,因邪热炽盛,熏灼脏腑,迫血妄行,侵扰血海,损伤胎气,冲任失固,致母猪流产等,正如朱丹溪所说:“胎漏多因于血热”。证见:重胎母猪流产、病程短、死亡快。

3.3.3.3ASF的治则

略。

3.3.3.4ASF的方药

成都蓄康生物根据非洲猪瘟的主要症候,运用自己创立的三因瘟疫病机学理论,审证求因、遣方组药,利用现代中药提取工艺,把32味中药加工而成,使用方便,效果确切。

与此同时,我们利用网络药理学相关软件分析,发现了此方的主要有效成分有12个,189个中药作用靶点,药物与非洲猪瘟共同靶点17个,主要通过抑制和杀灭病毒(抑制AFSVDNA复制和蛋白质合成等),调节炎症反应(细胞因子网络调节器)、免疫反应(免疫调节剂,选择性抑制5-脂加氧酶产物5-HETE和白三烯B4的形成等)、过敏反应、氧化反应等来保护脾脏、肝脏、肺脏等。比较清晰的明白了此方发挥功效主要是通过多成分协调、多靶点作用、多基因干预、多通路调控来干预病毒和机体。



3.3.4、育种抗非瘟

军事兽医研究所、山东蓝思种业股份有限公司、北京畜牧兽医研究所以及哈尔滨兽医研究所,四家研究机构共同在《中国兽医学报》上发表了一篇《我国蓝思白2号猪抗非洲猪瘟特性鉴定》。德国和英国等采用基因编辑技术培育抗非洲猪瘟猪。

3.3.5、猪舍现代化建设、多点式布局

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